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親和色譜填料結構

時間:2021-12-10 點擊次數:72

親和層析是根據一種生物分子間的特異相互作用來分離物質的層析方法,利用待分離物質與配體間所具有的特異性親和力來達到分離目的的一類特殊層析技術。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。


親和色譜填料由基體、配體和間隔臂三部分組成。


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基體


基體是有一定粒度、一定剛性、多孔的表面有大量可反應基團的固體物質,用于支撐間隔臂和配體,在其表面通過反應鍵合上間隔臂和配體后制得親和色譜填料?;w有兩類:一類是有機聚合物,如纖維素、交聯葡聚糖、交聯瓊脂糖等;第二類是多孔玻璃和硅膠。

基體應具備的條件:

1.基體是不溶性支持物,具有三維的多孔網絡結構,有足夠大的排阻極限,大分子能不受阻礙地進出內孔。

2.基體顆粒應該是均勻的球形并具剛性,粒度均勻,孔徑分布范圍小,機械性能好。

3.基體必須是親水性及惰性的,其骨架與蛋白質或其他重要生化物質的作用必須極弱,以降低非特異性吸附。

4.基體理化性質穩定,不會被制備填料時的試劑和流動相破壞。

5.基體必須具有大量表面活性基團。

配體

配體是接到基體或間隔臂上與蛋白質分子發生作用的部分,配體的選擇是親和色譜的關鍵。配體有兩類:一類叫特異性配體,只對一種蛋白質具有結合能力;另一類叫組特異性配體,也叫通用性配體,對某一類蛋白質具有結合能力。


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配體應具備的條件:


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配體與待分離的生物分子有特異性結合。

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配體既要能有效地與生物分子結合,親和力相當,又能有效地與所吸附的生物分子解離。

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配體既有能特異性地與待純化的蛋白質分子相結合的活性點,又有與基體或間隔臂相偶聯的化學基團。

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配體自身應具有良好的穩定性,能耐受偶聯以及洗脫時的溫度變化和化學環境,制得的填料可以多次重復使用。

盡可能選擇無離子基團、疏水性小的的配體。

間隔臂

親和色譜分離對象是生物大分子,其體積大,并且只能以特定的部位與配基作用,通常因為空間位阻效應,使其作用位點不易接近配體。所以,一般在配體與基體之間接上一個有一定長度的間隔臂,使配體伸離基體表面一定的距離,就可以克服這空間阻礙。

間隔臂的兩端都有能與其他基團反應的活性官能團,活性官能團如NH2、OH、COOH等,它的一端先與基體反應,形成帶間隔臂的基體,產物仍帶一個可反應的端基,可以再與配體偶聯。

親水性的、無離子基團的、沒有太多支鏈或大基團的、適當鏈長的小分子適合作間隔臂。

月旭科技親和層析填料:


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1. Protein A Solid/Protein A 4FF/Protein G Tanrose 4FF 抗體親和介質


2. Ni Tanrose 6FF(NTA/IDA)/Ni Tanrose 6HP(NTA)/Ni Tanrose 4FF (NTA/IDA)/Co Tanrose 6FF(NTA)金屬螯合親和介質

3. IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質

4. Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質

5. GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質

6. Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質

7. Endotoxin rem Tanrose 4FF內毒素親和填料

8. NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預活化親和填料



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